‘Молекулярный микроскоп’ находит спрятанным вирус СПИДа в органе

вирус

Исследователи развили сложное новое исследование, обнаруживающее укрытия ВИЧ внутри и снаружи клеток. “Это – фантастический новый метод, как который это собирается позволить нам визуализировать вирус в тканях, мы никогда не были в состоянии прежде”, говорит иммунолог Ричард Куп, заместитель директора Научно-исследовательского центра Вакцины в Национальном Институте Аллергии и Инфекционных болезней (NIAID) в Молитвенном доме, Мэриленд, кто не был вовлечен в исследование. Понимание от этого мощного молекулярного микроскопа, показанного на международной конференции по СПИДу на прошлой неделе, может разъяснить критические вопросы о постоянстве ВИЧ и, в конечном счете, о том, как избавить орган вируса.До настоящего времени оценкам ВИЧ в ткани — известный как анализ на месте — препятствовала одна главная трудность.

Наиболее распространенные исследования, использующие флуоресцентные маркеры или радиоактивные этикетки для точного определения места вируса в образце ткани, иногда испытывают затруднения при различении цели — РНК ВИЧ и ДНК — от окружения сотовых компонентов. В сущности маркер может mislabel ткань клетки как вирус, создавая фоновый шум, отбрасывающий анализ.

Новый метод имеет “очень мало шума”, говорит иммунолог Джейк Эстес из Лаборатории Фредерика Нэйшнэла Онкологического института Нэйшнэла (сестра NIAID) во Фредерике, Мэриленд, кто использовал его для производства высоко подробных изображений вируса СПИДа в различных тканях обезьяны (выше) которых он представил на конференции.Estes развил метод в сотрудничестве с Наступающей Диагностикой Клетки Хейворда, Калифорния, путем изменения уже существующего продукта компании RNAscope для обнаружения РНК ВИЧ, ДНК или обоих одновременно.

РНК и ДНК сделаны из нуклеотидов, которые пара с дополнением — гуанин, например, связывает с цитозином. Традиционные методы для картографирования генофонда ВИЧ используют длинные канатно-веревочные отходы этих нуклеотидов, названных олигомерами, чтобы найти и связать с комплементарными нитями ДНК или РНК в типовых тканях.

Эти олигомеры маркированы маркером, таким образом, они посылают сигнал, когда они достигают своего целевого показателя, позволяя исследователям создать изображение точно, где вирусный генофонд рассеян всюду по образцу ткани. Но олигомеры являются большими и несколько неуклюжими молекулами, и они иногда связывают с сотовыми компонентами кроме целевой последовательности.Новый метод Эстеса, напротив, использует более сложную систему исследования, почти устраняющую те виды ошибок.

В сущности подход раскалывает олигомер в два и отсылает обе половины для нахождения целевой последовательности. Их маркеры освещают, если дополнительный олигомер, соединяющий эти две половины, связывает с обоими, который только происходит, когда они паркуются друг рядом с другом на цели. Вероятность является чрезвычайно низкой, который два исследования сажали бы друг рядом с другом на чем-либо кроме ВИЧ.

ВИЧ является вирусом РНК, но он также преобразовывает в форму ДНК, позволяющую ему ткать свои гены в человеческую хромосому. Estes, работающий с вирусологом Джеффри Лифсоном, также развился, DNAscope для визуализации этой ДНК ВИЧ — назвал провирус — который интегрируется в клетки человека и может упорствовать в течение многих десятилетий, не подвергаясь нападению иммунной системой или антиретровирусным средством (ARV) наркотики. «Резервуары» инфицированных клеток, держащих скрытый провирус, являются основной причиной, почему сильные комбинации ARVs не могут уничтожить инфекции и вылечить людей.

Эстес, Лифсон и коллеги заразили обезьян обезьяноподобной версией вируса СПИДа и затем проанализировали ткани от многих частей их органов. Их RNAscope и DNAscope смогли отличить клетки, предоставляющие кров провирусу, вирусной РНК, или даже вирусам за пределами клеток намного более ясно, чем какой-либо предыдущий метод на месте. “Мы убеждены, что видим отдельные вириона и что это имеет изящную чувствительность и специфику”, говорит Эстес. Для проверения их работы дважды они посчитали вириона ВИЧ глазом по одному из их новых изображений, и затем сравнили их подсчет с утвержденной мерой вирусных уровней. “Мы видим красивую корреляцию”, говорит Эстес.Исследователи ВИЧ/СПИДА, работающие для исправления инфекцию, сталкиваются с несколькими препятствиями, которые эти новые объемы могли помочь преодолеть.

Каждый – отсутствие обнаружимого вируса в плазме крови пациентов на эффективной терапии ARV, мешающей исследователям оценивать, работает ли вмешательство, нацеленное на исправление инфекции. Несколько методов существуют для измерения изменений в резервуарах, но у каждого есть недостатки, которые новые объемы могли бы быть в состоянии добавить. Другое препятствие не знает точно, где в органе провирус предпочитает скрываться.

Если новые исследования могут помочь решить эту долгосрочную загадку, они могли бы очистить попытки сократить вирусные резервуары. “Если мы можем войти и видеть то, что происходит с вирусом в этих различных тканях с этим видом чувствительности и специфики, это собирается ответить на большое количество вопросов”, говорит Куп NIAID.


Блог Александрии